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1. 預期用途

該面板包括七個單獨編碼的安瓿,，每個安瓿含有從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA,。每個主要標準品/安瓿瓶都有不同的 JAK2 V617F 定義值,，作為總 JAK2 (NM_004972.3) 的百分比,。該面板旨在用作校準 JAK2 V617F 檢測的二級標準,、分析和試劑盒的主要標準,。這些材料不用作運行控制,。這些材料由外部實驗室測試，通過在等位基因特異性 (AS)-QPCR,、數(shù)字 PCR,、基于等位基因歧視的終點 PCR（包括 AS-PCR,、擴增難治性突變系統(tǒng)-PCR (ARMS- PCR）和基質輔助激光解吸/電離飛行時間（MALDITOF）質譜分析）和下一代測序。

該小組由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標準化專家委員會于 2016 年成立,，作為 WHO 第一個基因組 JAK2 V617F 國際參考小組,，NIBSC 代碼 16/1201. 這些材料不得用于任何其他用途。數(shù)據(jù)分析必須集中在 JAK2 基因座上,。不得嘗試識別源材料捐助者,。

2. 注意

該制劑不適用于人類或動物人類食物鏈。

對用于制備該組的細胞系進行了測試,，通過 PCR 發(fā)現(xiàn)其對 HIV1,、HTLV1、HBV 和 HCV 呈陰性,。在小組的制備中使用了一種 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉化的類淋巴母細胞系,。 EBV 是英國危險病原體咨詢委員會分類的第 2 類病原體。 EBV 序列可能存在于這些材料中,，但 DNA 是使用蛋白質變性和去除的方案制備的,，因此可能使病毒失活。但是,，不能消除活病毒存活的可能性,。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應被視為對健康有潛在危害,。應根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它,。此類安全程序應包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應小心謹慎,，以免割傷,。

3. 單元

該小組在一項涉及 29 個實驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進行了測試。獲得了以下 JAK2 V167F 占總 JAK2 百分比的中值,；材料 15/170 的共識值低于預期（與內部液滴數(shù)字 PCR 數(shù)據(jù)相比）,。值得注意的是，在材料 15/170 的 27 種（統(tǒng)計上合適的）定量方法中,，5 種方法報告的平均值為 0%,，這可能是由于該方法的檢測限或低采樣頻率的降低。水平目標,。僅來自數(shù)字 PCR 方法的結果 (n = 6),，所有這些方法都報告了大于 0% 的值，顯示平均值為 0.04% JAK2 V617F (±0.01%,；95% 置信區(qū)間)。與材料 15/172（0% JAK2 V617F）相比,，材料 15/170 明顯對 JAK2 V617F 呈陽性,。

4. 內容

生物材料原產(chǎn)國：英國和德國,。

該面板包括七個單獨編碼的安瓿，每個安瓿含有大約 5 μg 從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA,。使用“鹽析”方法提取基因組 DNA,，以不同的比例組合以產(chǎn)生一系列 JAK2 V617F 值占總 JAK2 的百分比，并在冷凍干燥前用 5mg/ml 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋,。

5. 存儲

將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下,。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料,。

6. 開店指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點,，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得,。要打開安瓿,，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進行操作,。

7. 材料的使用

在重新配制之前,，不應嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶,。

b,。在室溫下用 100 μl 無核酸酶水復溶每種凍干材料，在 1x Tris EDTA 緩沖液（10mM Tris,，1mM EDTA）中得到純化的基因組 DNA,。

C。使用移液器將每個安瓿的全部內容物轉移到無核酸酶管中,。

d,。讓材料在室溫下復溶 1 小時，并在使用前用移液管充分混合,。

e.使用前測量DNA濃度,；將所需的量添加到您的檢測中。

F,。如果將標準用于測定校準目的,，請確定通過分析這些標準的觀察值與預期值，為您的 JAK2 V617F 測定校正系數(shù),。有關更多詳細信息,，請參閱第一個 WHO 國際遺傳參考小組對 BCR-ABL1 易位定量的建議校準方法

G。如果您正在校準二級標準,，請在測試一級標準的同時測試此基因組 DNA,，并應用相關的校正因子。有關詳細信息，請參閱第一個 WHO 國際遺傳參考小組對 BCRABL1 易位定量的建議校準方法

H,。強烈建議在當天使用該材料重組,，不儲存。然而,，內部分析確定重組凍干基因組 DNA 在 +4°C 下至少穩(wěn)定 4 天（或在 -20°C 下 2 個月）,。應注意避免與其他樣品交叉污染。