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1. 預(yù)期用途

材料 18/118 是凍干、純化的基因組 DNA (gDNA)從 HCT 15 人細(xì)胞系中提取,。該材料與 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 相關(guān)的共有變異百分比,，以及每個(gè)二倍體人類(lèi)基因組質(zhì)量的共有變異和總 PIK3CA 拷貝數(shù)?？梢酝ㄟ^(guò)應(yīng)用計(jì)算（參見(jiàn)附錄 I）來(lái)稀釋材料,，以產(chǎn)生 PIK3CAc.1633G>A (E545K) 變體百分比范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品。該材料旨在用作校準(zhǔn)二級(jí)標(biāo)準(zhǔn),、試劑盒和測(cè)定的主要標(biāo)準(zhǔn),。該材料不用作運(yùn)行控制。該材料經(jīng)過(guò)外部實(shí)驗(yàn)室測(cè)試,，表明適合作為下一代測(cè)序 (NGS) 和數(shù)字 PCR (dPCR) 的標(biāo)準(zhǔn),。除了 PIK3CA c.1633G>A (E545K) 臨床相關(guān)變體外，該材料還包含可用于 NGS 檢測(cè)驗(yàn)證的非臨床相關(guān)變體（參見(jiàn)附錄 II）,。該材料由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專(zhuān)家委員會(huì)于 2019 年制定,，作為 WHO 第一個(gè) HCT 15 癌癥基因組國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，NIBSC 材料代碼 18/118,。

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標(biāo)準(zhǔn)品）

2. 注意

該制劑不適用于人類(lèi)食物鏈中的人類(lèi)或動(dòng)物,。

該制劑含有人類(lèi)來(lái)源的材料，經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn) HIV 1 和 2 Ab/Ag 檢測(cè)和 HBsAg（Hep b 表面抗原）陰性,，NAT（核酸檢測(cè)）檢測(cè)發(fā)現(xiàn) HCV 陰性,。但是，不能消除活病毒存活的可能性,。與所有生物來(lái)源的材料一樣,，這種制劑應(yīng)被視為對(duì)健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實(shí)驗(yàn)室的安全程序使用和丟棄它,。此類(lèi)安全程序應(yīng)包括戴防護(hù)手套和避免產(chǎn)生氣溶膠,。打開(kāi)安瓿或小瓶時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎，以免割傷,。

3. 單元

該材料在一項(xiàng)涉及 35 個(gè)實(shí)驗(yàn)室和 38 種測(cè)試方法的國(guó)際合作研究中進(jìn)行了測(cè)試,。從 NGS 和 dPCR 獲得基因型和共有變異百分比（表 1）。最終用戶能夠使用基于變體和總基因拷貝數(shù)全二倍體人類(lèi)基因組的稀釋公式進(jìn)一步稀釋材料（使用野生型材料 18/164,，或校準(zhǔn)到材料 18/164 的另一種野生型基因組 DNA）

質(zhì)量,，以在較低的一致變異百分比范圍內(nèi)達(dá)到進(jìn)一步的標(biāo)準(zhǔn),，從該范圍內(nèi)可以進(jìn)行測(cè)定校準(zhǔn)見(jiàn)第 7 節(jié)。

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國(guó)：英國(guó),。

編碼安瓿含有大約 5 μg 從人類(lèi)細(xì)胞系中提取的凍干純化基因組 DNA,。使用“鹽析”方法提取 gDNA，并在冷凍干燥前在 Tris-EDTA 緩沖液 5mg/ml 海藻糖中稀釋,。

NIBSC 18/118 HCT 15 癌癥基因組(標(biāo)準(zhǔn)品）

5. 存儲(chǔ)

將所有未開(kāi)封的凍干材料安瓿存放在 - 或以下,。

請(qǐng)注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會(huì)在環(huán)境溫度下運(yùn)輸這些材料,。

6. 開(kāi)瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個(gè)“易開(kāi)”顏色的壓力點(diǎn)，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連,。各種類(lèi)型的安瓿破碎機(jī)可商購(gòu)獲得,。要打開(kāi)安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料,，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說(shuō)明進(jìn)行操作,。

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱(chēng)量?jī)龈刹牧系娜魏尾糠?/p>

a,。如上文第 6 節(jié)所述打開(kāi)安瓿瓶,。

b。在室溫下用 100μl 無(wú)核酸酶水復(fù)溶凍干材料,。

C,。使用移液器將樣品轉(zhuǎn)移到無(wú)核酸酶管中，確保收集最大可用量,。

d,。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時(shí)，然后用移液管充分混合,。 1x Tris-EDTA 緩沖液中的 DNA 濃度現(xiàn)在約為 50ng/μl,，但建議在使用前使用自己的定量方法進(jìn)行確認(rèn)。不必?fù)?dān)心材料中可能出現(xiàn)的白色斑點(diǎn),。

e.這種變體材料可以與材料 18/164（野生型）結(jié)合以產(chǎn)生任何選擇的變體百分比的標(biāo)準(zhǔn)

F,。將所需的量添加到您的檢測(cè)中。材料可以進(jìn)一步稀釋?zhuān)ㄓ脽o(wú)核酸酶水或合適的緩沖液）,，以達(dá)到適合您檢測(cè)的 DNA 濃度,。

G。應(yīng)在同一測(cè)定中分析初級(jí)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn),，以將值分配給二級(jí)標(biāo)準(zhǔn),。