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 NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 旨在用于為每個(gè)樣本體積中巨細(xì)胞病毒 (CMV) 可擴(kuò)增基因組的拷貝數(shù)指定一個(gè)值,。 當(dāng)用于分配時(shí),，實(shí)際的 CMV 校準(zhǔn)材料 NIST SRM 2366a 可以提供對(duì)國(guó)際單位制 (SI) 組織或流體（如血漿）中 CMV 病毒載量測(cè)量結(jié)果的可追溯性,。

一個(gè)單元的 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 由一個(gè)無(wú)菌的 0.5 mL 全氟烷氧基 (PFA) 含氟聚合物小瓶組成,，其中包含大約 150 μL 提取的 DNA,，溶解在 TE 緩沖液,，pH 8.0 中,。 TE 緩沖液由 10 mmol/L 2-氨基-2-(羥甲基)-1,3-丙二醇 (Tris) 和 1 mmol/L 乙二胺四乙酸 (EDTA) 四鈉鹽在去離子水中組成。 CMV DNA的形式是細(xì)菌人工染色體——稱為CMV TowneΔ147 BAC——包含Towne菌株CMV的基因組[1,2],。

表 1. SRM 2366a 的 CMV 認(rèn)證拷貝值

這些認(rèn)證值是根據(jù)使用液滴數(shù)字 (ddPCR) 系統(tǒng) [3] 和平均液滴體積的直接測(cè)量進(jìn)行的五次聚合酶鏈反應(yīng) (PCR) 測(cè)定的一致結(jié)果確定的,。使用高斯隨機(jī)效應(yīng)模型 [4] 計(jì)算認(rèn)證值及其不確定性。 NIST 認(rèn)證值是 NIST 對(duì)其準(zhǔn)確性有最高置信度的值,，因?yàn)樗幸阎蚩梢傻钠顏?lái)源都已被調(diào)查或考慮 [5],。

不確定性：

該材料中分析物的真實(shí)值預(yù)計(jì)在給定的概率區(qū)間內(nèi)，置信水平約為 95%,。出于不確定性傳播的目的,，請(qǐng)使用規(guī)定的 u(X) 或 CV，以最適合您的目的為準(zhǔn),；這些值與 60 個(gè)自由度相關(guān),。

可追溯性：

認(rèn)證值可追溯至每體積的拷貝數(shù)，表示為每微升溶液中可擴(kuò)增的 CMV 實(shí)體數(shù),，通過(guò)身份確認(rèn),、ddPCR 計(jì)數(shù)測(cè)量、計(jì)數(shù)到實(shí)體的 Poisson 端點(diǎn)轉(zhuǎn)換的有效性,，用于數(shù)字 PCR 端點(diǎn)[6],，以及在 NIST 進(jìn)行的校準(zhǔn)體積測(cè)量。計(jì)量溯源性是針對(duì)體積的 SI 單位,。

認(rèn)證到期：

 NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 的認(rèn)證在指定的測(cè)量不確定度范圍內(nèi)有效,，直到 2025 年 8 月 1 日，前提是 SRM 按照本證書(shū)中的說(shuō)明進(jìn)行處理和存儲(chǔ)（參見(jiàn)“處理,、存儲(chǔ)和使用說(shuō)明”） ,。如果 SRM 損壞、污染或以其他方式修改,，則認(rèn)證無(wú)效,。

SRM 認(rèn)證的維護(hù)：

NIST 將在其認(rèn)證期間監(jiān)控此 SRM。如果在本證書(shū)到期前發(fā)生影響認(rèn)證的實(shí)質(zhì)性技術(shù)變化,，NIST 將通知購(gòu)買者,。注冊(cè)（見(jiàn)附表或在線注冊(cè)）將有助于通知,。

處理、儲(chǔ)存和使用說(shuō)明

處理： NIST SRM 2366a - 巨細(xì)胞病毒DNA 是一種病毒和細(xì)菌 DNA 源材料,。 由于對(duì)提取的 DNA 的感染狀態(tài)沒(méi)有達(dá)成共識(shí),，請(qǐng)將 SRM 2366a 作為生物安全處理能夠傳播傳染病的 1 級(jí)材料 [7]。 SRM 2366a 和衍生解決方案應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)?、州和?lián)邦法規(guī)進(jìn)行處理,。

儲(chǔ)存：NIST SRM 2366a 小瓶應(yīng)儲(chǔ)存在 2 °C 至 8 °C 之間的黑暗中。 不要凍結(jié),。

使用：在取出樣品等分試樣進(jìn)行分析之前,，小瓶應(yīng)通過(guò)倒置混合并離心，而無(wú)需打開(kāi)小瓶蓋,。 為使認(rèn)證值有效,，打開(kāi)小瓶后應(yīng)立即取出材料并立即處理。 這些材料可以適當(dāng)稀釋,，但必須立即使用,。 認(rèn)證值不適用于重新封蓋的小瓶中剩余的任何材料。 不要將任何 DNA 溶液直接暴露在陽(yáng)光下,。

制備與分析

樣品制備：CMV TowneA7 BAC來(lái)自新澤西醫(yī)學(xué)院(新澤西州紐瓦克H.朱),，在NIST的大腸桿菌(E.coli)細(xì)胞中進(jìn)行增殖?？侱NA(CMV和E.Coli)被分離,、純化并重新懸浮在TE緩沖液中。在調(diào)整濃度后,，允許材料在4攝氏度的PFA容器中平衡,，直到瓶裝。就在裝瓶之前,，將瓶子放入層流罩內(nèi),，置于室溫下，輕輕混合,。將溶液轉(zhuǎn)移到帶有自動(dòng)移液管的PFA小瓶中,，然后蓋上蓋子，貼上標(biāo)簽,，并在4℃下儲(chǔ)存,。

CMV同源性的確認(rèn)：Sanger和下一代測(cè)序(NGS)證實(shí)SRM 2366a中的CMV DNA與參考序列AY315197.2完全一致。